Plateforme de lipidomique

Compétences techniques

Séparation de petites molécules (masse comprise entre 30 et 3000 Da) par chromatographie liquide ou gazeuse suivie de leur quantification/caractérisation grâce à différents types de détecteurs spectraux (UV, Fluo) de détecteurs de charge (Corona) ou encore de détecteurs sélectifs de masse simple quadripôle (Q), triple quadripôle (QqQ) et quadripôle/temps de vol (Q-TOF).

La plateforme prend en charge les demandes d’analyses LCMS² ou GCMS dans leur intégralité :

• activité de conseil dans la mise en place de protocoles expérimentaux,
• design à façon des analyses,
• réalisation des étapes pré-analytiques (stockage, extraction des échantillons) et analytiques (ciblées ou non ciblées),
• rendu des résultats,
• participation à la valorisation des résultats (rédaction de rapports de synthèse, publications scientifiques, transfert technologique…).

Domaines d'application

Activités de R&D ou préclinique.

Dosage de lipides, médicaments ou molécules actives (vitamines…), analyses environnementales (titrage d’endotoxines dans des matrices complexes).

Analyses et équipements

Développement de méthodes analytiques par chromatographie couplée à la spectrométrie de masse, en vue de doser quantitativement et ou qualitativement des molécules de ratio masse/charge inférieur à 3kDa tels que les lipides et biomarqueurs hydrophobes.

Etudes pré-analytiques

• Etapes de stockage, broyage, ultracentrifugations, extractions, pré-purification par SPE, collection de fractions, concentrations sous vide, hydrolyses et dérivations.
• Séparation et collection des composés purifiés par méthode chromatographiques.

Analyses quantitatives et qualitatives des composés

• Identification et qualification des molécules après séparation, par spectrométrie de masse :
  • Détection de molécules d’intérêts, de par leur rapport masse sur charge, détermination d’une concentration précise pour un composé identifié.
    • LC-spectrométrie UV
    • LC-spectrométrie fluo 
    • GC- spectrométrie de masse simple à technologie quadripolaire (modes SIM, SCAN)
  • Analyse structurale et quantitative de lipides dans le cas de cancers digestifs, maladie d’Alzheimer ou athérosclérose.
    • LC-MS/MS à triple quadripôles (modes SIM, SCAN, ion précurseur, perte de neutres, ion produit, SMR, MRM)
• Dosage d’endotoxines bactériennes (LPS) dans des matrices complexes, là où les méthodes commercialisées type LAL, EndoLisa... sont inopérantes :
  • Technique brevetée EndoQuant : détection et dosage des endotoxines, sous forme active (libres) ou inactive (neutralisée), dans divers matrices (fluides, tissus, milieux, préparation médicales…) par couplage d’une chromatographie liquide à la spectrométrie de masse en tandem (LCMS2)

Références des équipements

• Chromatographie liquide couplée à des détecteurs autres que des spectromètres de masse:
  • Chaine Agilent LC 1100 couplée soit à un détecteur à barrettes de diodes (UV/vis) soit à un à un détecteur à fluorescence (1260 FLD) avec possibilité de collecter les molécules détectées (1260 FC-AS)
  • Chaine UHPLC U3000 couplée à un détecteur de charge Corona
  • Chaîne UPLC U3000 configurée « phase normale » pour la séparation et la collection de molécules selon leur charge
• Chromatographie liquide couplée à des détecteurs de masse en tandem pour analyses quantitatives ciblées :
  • HPLC 1200 series + QqQ 6460 (sources APCI/ESI) - Agilent
  • UHPLC 1260 series + QqQ 6490 (sources APCI/ESI) - Agilent
• Chromatographie liquide couplée à des détecteurs de masse en tandem pour analyses quantitatives non ciblées :
  • UHPLC Exion + QTOF 6600 (sources APCI/ESI) - Sciex

Exemples de réalisations

• Prise en charge de l’ensemble des analyses lipidomiques des différents work packages du labEx LipSTIC.
• Dosage des acides gras poly-insaturés chez des patients COVID19.
• Dosage de marqueurs d’oxydation lipidique dans la plaque d’athérome
• Activité valorisée par plus de 80 articles scientifiques (IF moyen > 6,18) depuis 2012